Пцр анализ крови при туберкулезе легких

ПЦР на туберкулез или полимеразная цепная реакция – наиболее современный и продвинутый способ диагностики заболевания. В чем его преимущество по сравнению с другими методами, и оправдывает ли он себя на самом деле?

Принцип ПЦР- исследования

У каждого живого существа, по крайней мере, на нашей планете, есть уникальный «отпечаток» — ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), которая отвечает за передачу наследственных факторов от предков к потомкам. Структурно эта молекула представляет собой две нити из молекул-азотитых оснований, удерживаемые рядом друг с другом химическими связями и скрученные в спираль (считается, что для компактности). Из курса биологии вы можете помнить такие названия, как аденин (А), гуанин (Г), тимидин (Т) и цитозин (ц). Это 4 нуклеотида, которые и создают последовательность ДНК. Вирусы хранят свою генетическую информацию в другой нуклеиновой кислоте – РНК. Информация об уже изученных ДНК и РНК хранится в научных базах лабораторий. После того, как был изобретен метод ПЦР, для многих возбудителей различных заболеваний (бактерии, грибки и вирусы) были созданы свои специфические генетические детекторы (праймеры) — уникальные последовательности нуклеотидов, характерных только для конкретного возбудителя. И если поместить их в пробирку с исследуемым материалом, при наличии в нем ДНК или РНК «живых» возбудителей, праймеры запускают реакцию репликации – создания огромного числа копий, которое можно идентифицировать визуально. Т.е. они начинают копировать свою ДНК/РНК десятки раз. И при подсчете результатов сотрудники лаборатории могут понять, есть ли искомые бактерии и вирусы в исследуемом образце, или нет, именно поэтому результаты ПЦР чаще всего качественные, т.е. «обнаружено» или «не обнаружено».

ДНК — диагностика, ПЦР анализ, что это 

ПЦР метод  ДНК диагностики, — это один из наиболее современных, высокотехнологичных методов исследования. Изобретенный в 1983 году метод и сейчас считается фундаментальным в молекулярной диагностике.

  • Американский ученый, который придумал способ значительного увеличения малых концентраций фрагментов ДНК в биологической пробе, получил за него Нобелевскую премию.
  • Для анализа из физиологических жидкостей извлекают одноцепочечную РНК, моделируют на ее основе двуцепочечную ДНК и многократно дублируют с помощью специального фермента полимеры.
  • Поэтому метод называется полимерная цепная реакция или сокращенно ПЦР.
  • Выявление ДНК/РНК методом ПЦР позволяет диагностировать такие заболевания, как ВИЧ, коронавирус, вирусные гепатиты, инфекции, передающиеся половым путем, туберкулез, боррелиоз, энцефалит и многие другие.
  • Метод используют в археологии, криминалистике, генетике.

Что представляет собой ПЦР

Данная диагностика является весьма точной, так как позволяет за несколько часов определить наличие инфекции, ее достоинства просто неоспоримы:

  1. Практически стопроцентный способ найти возбудителя за счет того, что в пробе можно определить от десяти до ста клеток.
  2. Весь рабочий процесс диагностики составляет от четырех до пяти часов максимум.
  3. С ее помощью можно выявить некий особый фрагмент, присутствующий лишь у конкретного вируса.
  4. Диагностирование туберкулеза легких, хотя используя другие методики определить его практически невозможно.

Благодаря этим достоинствам, заразившегося человека можно своевременно изолировать с целью прекращения дальнейшего распространения инфекции, а также приступить как можно раньше к его лечению.

Еще один немаловажный плюс полимеразной цепной реакции (ПЦР) – это возможность определить устойчивость к конкретному препарату имеющейся микобактерии, что повышает эффективность назначаемого и проводимого лечения. Данная диагностика проводится из материалов человека, с которым контактировал заболевший или же в случае, когда он не знает от кого он мог заразиться, материал берется у самого пациента.

Данный вид исследования широко применяется в иммунологии, микробиологии и вирусологии, он основан на методиках генной инженерии. И хотя этот метод достаточно молодой (около тридцати лет) он активно применяется во многих ситуациях, когда осуществление других анализов просто невозможно.

Что представляет собой ПЦР

Полимеразная цепная реакция основана на получении из материала больного фрагментов генома, последующий ее биосинтез и молекулярно-генетические изучения определяют, к какому именно классу микроорганизмов относится данный вирус.

Читайте также:  Проба Манту в 1 год: какая должна быть реакция в норме

Для того чтобы ПЦР было возможно осуществить, специалисту, необходимы:

  • нуклеотиды или какие-либо сложные соединения, которые представляют собой основной материал РНК или ДНК;
  • праймеры, представляющие собой участников ДНК, с которых собственно и берет начало создание или биосинтез;
  • полимераза, которая ускоряет ход данного процесса.

ПЦР на такое заболевание, как туберкулез проводится исключительно утром, в то время когда мокрота еще не будет удалена из желудка. Аспирация проводится в стационаре, хотя посев на данное заболевание должен проводиться трижды.

Несмотря на свою точность, детям полимеразную цепную реакцию не делают, здесь на помощь приходит только реакция Манту, связано это с высокой стоимостью и необходимостью обращения в специализированную клинику, что не представляется возможным в случае со всеми школьниками.

Как собирается биоматериал

ПЦР анализ – процедура очень сложная, хоть и занимает в среднем всего 4 часа. На точность результатов могут повлиять самые разнообразные факторы, которые простому обывателю могут показаться сущими пустяками. Одним из таких факторов является сбор образцов для исследования. Действительно, может показаться, что здесь нет ничего сложного, и справиться с этим под силу любому, даже ребёнку. На самом деле при сборе образцов для диагностики туберкулеза надо соблюдать одно очень важное правило – необходимо, чтобы все, с чем приходится взаимодействовать человеку при сборе анализов, было стерильно или по максимуму чисто.

Так например, при использовании крови из вены в качестве биоматериала анализ берет опытный специалист стерильным шприцом.

Проба собирается в пробирку и на протяжении всего исследования эксплуатируется в специальных условиях, предотвращающих свертывание крови.

Анализ мочи на микобактерии туберкулеза берется обычно утром, когда человек только проснулся и пошел в туалет. При этом емкость для сбора образца должна быть стерильной, а перед сбором необходимо пройти водные процедуры.

СЕНСАЦИЯ ! Перейди по ссылке:Где можно сделать ПЦР на туберкулез

Соскоб с половых органов у мужчин и женщин производится соответствующими врачами в медицинском учреждении.

Сбор сложных анализов, например, жидкость спинного мозга, проводится квалифицированным специалистом в стационарных условиях.

Обычно ПЦР крови на туберкулез назначается в следующих случаях:

  • при получении спорных результатов после флюорографии;
  • при малейшем подозрении с целью заблаговременно обнаружить патологию и предпринять соответствующие меры;
  • если человек живет в окружении родственников, больных туберкулезом.

Направление на обследование методом полимеразной цепной реакции можно получить от таких врачей, как пульмонолог, фтизиатр или терапевт. Диагностика туберкулеза у детей методом ПЦР назначается, как правило, педиатром.

Минусы ПЦР-диагностики

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

  • Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
  • Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
  • При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
  • Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
  • Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.
Читайте также:  Антибиотики при простуде: список для взрослых и детей

Тест CLINISPOT-TB

Это наиболее современный анализ на туберкулез. Его также называют T-SPOT. Суть теста:

  • при наличии в организме микобактерий на них реагирует иммунная система;
  • эта реакция заключается в выделении некоторыми Т-лимфоцитами гамма-интерферона;
  • суть теста – в определении числа таких активированных лимфоцитов.

Спот-анализ позволяет выявить бактерии даже в очень небольшом количестве. Его используют для выявления латентных, скрытых форм болезни, а также для диагностики патологии у людей с угнетенным иммунитетом (например, на фоне СПИДа). Тест высокоспецифичен, ложноположительные результаты практически не наблюдаются. Это означает, что положительный результат практически в 100% говорит о наличии туберкулеза.

Чувствительность же, то есть способность выявить инфекцию, у СПОТ-анализа достигает 96%, даже при внелегочных формах болезни. Для сравнения, чувствительность реакции Манту составляет менее 70%. Т-СПОТ выпускается в Великобритании.

QuantiFERON-TB Gold in-Tube test – еще один современный метод выявления туберкулеза по крови. Как и Т-СПОТ, его используют при высоком риске заражения (например, проживание в семье больного) в сочетании с отрицательной пробой Манту. Производится такая тест-система в Австралии.

Существуют тесты для одновременного быстрого выявления туберкулеза и устойчивости его возбудителя к рифампицину и рифампицину + изониазиду. Ими пользуются в крупных противотуберкулезных центрах. Это INNO-LiPA Rif, TB kit и GenoType MTBDRplus. Однако они не могут использоваться для подтверждения диагноза болезни.

Как расшифровываются результаты

Не всегда анализ бывает правдивым. Ложноположительный результат бывает только в том случае, если не соблюдены все требования по подготовке и сдаче мазков и т.д. Именно поэтому следует как пациенту, так и врачам строго придерживаться всех правил, о которых говорилось выше.

При положительных результатах простой формы количество содержащихся возбудителей является ничтожно малым. Дело в том, что в медицине существуют определенные нормы, благодаря которым можно определить степень устойчивости к заболеваниям.

Но в сложной расшифровке теста определяется конкретное содержание тех или иных микроорганизмов, что позволяет сделать самые точные выводы. Естественно, ни один пациент не сможет самостоятельно расшифровать все эти цифры, а врач способен подробно объяснить больному.

Именно эти цифры показывают, где расположены очаги, на какой стадии находятся и что является причиной возникновения заболевания туберкулезом.

На основании расшифровки специалисты назначают метод лечения и пр. Никогда не стоит забывать о том, что малейшее наличие возбудителей свидетельствует об их присутствии в организме. Поэтому рано или поздно инфекция может распространиться дальше и стадия туберкулеза увеличится. Не следует безответственно относиться к собственному здоровью, всегда следуйте рекомендациям специалистов.

ПЦР на туберкулёз назначают, когда невозможно поставить диагноз или нельзя провести иные исследования. Анализ даёт возможность выявить палочку Коха на самых ранних стадиях и своевременно начать лечение.

Описание ПЦР на туберкулёз

Показания для ПЦР диагностики

Как расшифровываются результаты

Виды анализов ПЦР на туберкулёз

Подготовка к сдаче анализа

Как проводится ПЦР на туберкулёз

Расшифровка результатов обследования

Особенности ПЦР на туберкулёз у детей

Сколько стоит ПЦР на туберкулёз?

Комментарии и Отзывы

Расшифровка результатов

Качественный анализ ПЦР дает 2 вида результатов «обнаружено» или «не обнаружено». Они означают положительный и отрицательный вердикт соответственно. Ответ «обнаружено» означает, что в исследуемом образце присутствует ДНК инфекционного агента, и с вероятностью 97% организм заражен туберкулезом. Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии ДНК палочки Коха во взятой пробе биологического материала, и дает 97% вероятность, что в теле нет большого количества микобактерий, и 60%, что человек не заражен.

Наибольшую специфичность для диагностики туберкулеза имеют анализ крови и мокроты. При положительном результате они указывают на инфицирование организма, которое требует проведения срочных терапевтических мероприятий. Исследования других биоматериалов могут указывать не на течение заболевания, а всего лишь на присутствие чужеродных бактерий. Это происходит, когда человек является носителем болезни, но не распространяет инфекцию в окружающую среду и не заражает здоровых людей.

Количественный анализ ПЦР проводят реже, и расшифровкой его результатов занимается лечащий врач. Показатели исследования используют для определения активности заболевания и степени поражения организма. Опираясь на полученные данные, специалист может определить эффективность лечения, и при необходимости скорректировать терапевтическую схему.

Туберкулез всегда был и остается одной из самых серьезных проблем для здоровья всего человечества. Современные методы диагностики позволяют обнаружить заболевание на ранней стадии, чтобы вовремя начать лечение. Туберкулиновая проба, микроскопия мазка, посев бактерий на искусственные питательные среды хорошо зарекомендовали себя в сфере лабораторной диагностики туберкулеза. Однако длительное ожидание результатов и повышенная частота ложноположительных показаний сделало их устарелыми и вывело на первый план более современные технологии. ПЦР анализ является высокоспецифичным и высокоэффективным методом диагностики туберкулеза. Его результаты наиболее достоверны среди всех предложенных лабораторных методик обнаружения палочки Коха. Он позволяет не только вынести окончательный вердикт, но и провести необходимую дифференциальную диагностику.

Диагностика туберкулёза с помощью Квантиферонового теста

Полной альтернативой Манту является Квантифероновый тест. Метод основан на получении иммунного ответа на туберкулёзную палочку. В крови определяется уровень гамма-интерферона исходя из показателей которого выносится заключение о наличии или отсутствии туберкулёза. Квантифероновый тест является очень точным и чувствительным. Даже у людей с ослабленной иммунной системой и ВИЧ-инфицированных Квантифероновый тест выявляет бактерии туберкулёза. Время исследования крови по тесту занимает от 3 до 10 дней.

Применяется Квантифероновый тест в следующих случаях:

  • для выявления микобактерии туберкулёза у людей из группы риска;
  • в случае контакта с больным туберкулёзом;
  • для массовой диагностики туберкулёза в детских учреждениях;
  • для контроля эффективности противотуберкулёзного лечения в тубдиспансерах;
  • если есть противопоказания для проведения туберкулиновой пробы и «Диаскинтест».

Квантифероновый тест имеет ряд огромных преимуществ перед пробой Манту и «Диаскинтест». Прививка БЦЖ не влияет на результаты Квантиферонового теста его можно проводить, в период карантина в детских учреждениях. Благодаря Квантифероновому тесту интерпретация результата исследования на туберкулёз гораздо более объективна.

Квантифероновый тест является абсолютно безопасным и не имеет совершенно никаких противопоказаний! Ведь исследование крови, взятой для теста, проводится в пробирке. Исследование этим методом широко используется в детской практике в России и за рубежом. Квантифероновый тест очень чувствительный, он выявляет микобактерии туберкулёза в 99% даже в инкубационном периоде болезни.

Возможны ли ложные результаты ПЦР

Часто больных интересуют причины ложноотрицательных и ложноположительных анализов.

Ничего удивительного в этом, учитывая особенности исследования, нет. Ведь ПЦР позиционируется, как исследование, отличающееся минимальным риском получения ложных результатов.

Однако, как отмечают доктора, столкнуться с неправильными результатами все же иногда приходится. Происходить подобное может, например, если представитель сильного пола игнорирует рекомендации по подготовке, занимаясь сексом накануне обследования или помочившись. В этом случае итог моет быть как ложноположительным, так и ложноотрицательным.

Возможны ли ложные результаты ПЦР

Если мужчина употребляет алкогольные напитки или испытал сильный стресс накануне сдачи материала, велик риск получить ложноположительные итоги. Так как организм будет находиться в состоянии возбуждения.

Пропустить патологии с ложноотрицательными итогами можно, если провести контрольное исследование слишком рано после окончания курса приема антибиотиков. Или если попасть в период инкубации, когда количество вируса в организме ниже показателя, который может быть замечен тест-системой.

Если у доктора появятся основания полагать, что результаты ложные, он обязательно направит больного на повторную сдачу образцов для исследований. Порекомендовав подготовиться в этот раз по всем правилам.